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                微生↑态活菌总论(上)



                录入时间:2010-8-26 17:00:43 来源:中国药典2010版第三部

                微生态活菌总论
                微生态活菌制品系由人体正常菌群成员或具有促进正◎常菌群生长和活性作用的无害外籍细菌,经培养、收集菌体、干燥成菌粉后,加入适宜辅料混合制成。用于预防和治疗因菌群失调引ζ 起的相关症状和疾病。
                微生态活菌制品必须由非致病的活菌组成,无论在生产过程、制品贮存和使用期间均应保持稳定的活菌∩状态。它可由◥一株、多株或几◥种细菌制成单价或多价联合制剂。根据其不同的使用途径和方法可制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂等多种剂◇型。
                基本要求
                微生态活菌制品的制备方法、工艺应能保证成品含有足够的活菌数量,保持其稳定性,同时应防止外源因子的ぷ污染。
                生产☆和检定用设施、原材料▓及辅料、水、器具、动物╳等应符合“凡例”的有关要求。
                制造
                生产用菌种
                生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规定”的有》关规定。
                1.       名称及来∩源
                选用的生产用菌种应来自人体内正常菌群,或对※人体无毒无害、具有促进正常菌群生长和活性作用的外籍细菌。细菌的分离过程和传代背景≡应清晰,应具备稳定的生@ 物学和遗传学特性,并能保持稳定的活菌状态,经实▅验室和临床试验证明安全、有效。
                2.       种子批的建★立
                菌种的属、种型分类鉴定,应依据最新版伯杰氏细菌系统鉴定手册(Bergry’s Manual of Systematic Bacteriology)和伯杰氏细菌命名手册(Bergry’s Manual of Determinative Bacteriology)的有》关规定进行,包括形态、生长代谢特性╲检查。原始种子或主种▽子还应做遗传特性和抗生素敏感性等检查。
                三级种子批常规检查包括①以下3项:
                (1)培养特性及染色镜检    将菌种接种于适宜培养基,置有氧或厌氧环境中培养,观察其生长情况,确定菌种为需氧性细菌或厌氧性细菌;以划线法观察在琼脂平皿ω 上生长的单个∑菌落的形状、大小、表面、边缘、透明度、色泽等特征;也可观察菌种在不同温度、pH或不同浓度的氯化钠溶液等条件下的生长特性等。
                取菌种的新鲜』培养物涂片做革兰氏染色,在显△微镜下观察菌体的染色反应、形态、大小和排列等,有芽孢的细菌应○同时观察芽孢的形状、大小和位置(也可增做芽孢染色)。检查结果均应符合原始菌♀种的特性。
                (2)生化反应    按附录ⅪⅤ“细菌生化反应培●养基”选择相应的培养基或其他适宜的方法进行,结果︾应符合原始菌种的特性。
                (3)毒性试验    毒性试验是通过动物试验检●查菌种是否存在不安全因素,以保证人体使用安全。
                用体重18~22g小鼠5只,每只腹腔注射0.3ml新鲜菌液(不少于1.0×109CFU/0.3ml),连续观察3天,小鼠均应健康存活、体重增加;或每只小鼠经口『灌胃∏0.5ml新鲜菌液(不少于1.0×109CFU/0.5ml),每天1次,连续3天,从第1天灌胃起连续观々察至第7天,小鼠均应健康存活、体重增加。
                除¤另有规定外,原始种子或主种子批还需进行以下检查:
                (1)细菌代谢产物——脂肪酸测定    照气相◥色谱法(附录Ⅲ C)或其他适宜的方法进行,应符合该菌种的◤特性。
                (2)遗传特☆性分析    可采用细菌DNA的G+Cmol%的含量测定或其他适宜方法进行,应符合该菌种的遗传特性。
                (3)抗生素敏感性试验   采用琼脂扩散纸片法△或其他适宜方法◥进行菌株的抗生素敏感性检查,应符合该菌种︼的特性。
                (4)稳定性试验    菌种在适宜培养基中,连续传代30代次后,将第30代培养物作种子批检定,全部检查结果应与原始菌种的特性一致。
                4.种子批的保存≡
                原始种子和主种子应冻干保存于8℃以下,工作种子应№置于适宜温度保存。
                菌粉制造
                应包括种子液制备、大罐培养、收获菌体(或芽孢)和菌体干燥制成菌粉。如生产多价制品时,应每种菌分别培养,制备单价菌粉。
                1.       生产用种子【
                启开工作种子》批菌种,接种于适宜培养基进行多级种子扩增,应涂片做革兰氏染色,在显微镜下观察5~10个视野,细菌的染色反应、形态应一致并符合原〒始菌种的特征。制备过程应◢防止污染,菌种传代次数应符合规定♀。
                2.    生产用培→养基↑
                采用经批准的培养基用于生产。
                3.       培养
                采用液体培养。将种子液置适宜条件下培养(包括厌氧或需氧、温度、时间等),培养过程中取样涂片做革兰氏染色镜检、pH值检测等,芽孢菌需进行芽孢〖形成率的检测,均应ξ符合规定。培养结束后取样做纯菌检查,如发现污染应予废弃。
                生产多价制品的单价菌粉时,应分别培养。
                4.       收获〓菌体和制成菌粉
                培养结束后离心收获湿菌♂体,与适宜的分散剂、稳定剂◥混合。采用真空冷冻干燥法干燥菌体,芽孢菌可采用加热干燥方法,再经粉碎、过筛制成粉末状菌粉。
                5.       菌粉的保存及有效期
                应通过活菌稳定性试验确定保存温度和有效期∏。
                6.       菌粉检定
                按“菌粉检定”项进行,符合规定后方可进行半成品『配制。
                半成品
                1.       配制
                同一工作种子批菌种生产的最多2批单价菌粉可按批准的比例与辅料混合均匀后制成半成品。配制多价制品时,应将各单价菌▲粉、辅料按配方比例和配制程序混合均匀,配制过程应防止污染。
                2.       半成ㄨ品检定
                按“半成品检◣定”项进行,应符合规定。
                成品
                1.       剂型制备
                根据制品的用途、使用对象和用药途径等因素确定剂型。制备过程应符合附录Ⅰ“制剂通则”项下相关剂↓型的规定。
                2.    分批
                成品批号应在半成品配制♀后确定,配制日期即为生产日期。同一批号的制品,应来源一致、质量均一,按规定要求抽样检验后,能对整批制〓品作出评定。应根据验证结果,规定←半成品的分装时间,如超过24小时,应分为不同的亚批。
                3.       分装、规格和包ぷ装
                制品的分装应符合附录Ⅰ“制剂通则”的卐有关规定。包装应符合“生物制品包装规程”的有关规定。规格╲应符合批准的规格要求。
                检定
                微生态活菌制品质量检定应包括菌粉检定、半成品∩检定和成品检定。
                菌粉检定
                1.外观
                应为白色、灰白色或灰黄色粉末。
                2.目的菌检查
                取少量菌粉加入◇适量,灭菌生理氯化钠溶液或其他适宜稀释液后,涂布在适宜琼脂平〒皿上,在适宜条件下培养,其培养⌒ 物的生长特性和染色镜检的特征应符合生产用菌种特征。
                3.杂菌检查
                方法和结果判断见本总论附录3。如不符合规定应废弃。
                4.干燥失重
                菌粉中残余水分的含量会直接影响活菌的生⌒存,须■进行菌粉干燥失重的检查。应按附录Ⅶ L或仪器方法卐测定。
                5.活菌数测定
                测定每克菌粉中含有的活菌数量。方法见本总论附录2。
                半成品检定
                半成品须做杂ω菌检查,根据用药途径※确定杂菌检查的质控指标。方法和结果判断见本总论附录3。
                成品检定
                1.       鉴别试验
                检查成品中所含的目的菌〗是否符合生产用菌种的特性。即按上述“种子批的检定”方法进行生长特性、染色镜检和生化反应检查,应符合规定。对于多价♂制品,则须∏逐一检查单价菌特性。
                2.        理化检查
                (1)       外观  根据剂型,观察制品的外观、色泽。
                片剂外观应完整、光洁,呈白色或类白色,间有菌粉色斑;颗粒剂、散剂和胶囊→剂内粉末的粒子大小、色泽应均匀,间有菌粉色斑。
                (2)干燥失重  按附录Ⅶ L或仪器▂方法测定,减失重量应不得超过5.0%,芽孢菌制品应不得超过7.0%。
                (3)粒度  散剂和颗粒剂应进行粒度检查。
                     按附录ⅤG第二法,采用单筛分法或双▃筛分法检查,应符合规定。
                (4)装量(重量)差异  各剂型按附录】Ⅰ“制剂通则”的相应规定↓进行,应符合规定。
                (5)崩解时限  胶囊剂、片剂按附录ⅤC进行,应符合规定。
                3.活菌数测定
                按本总论附『录2方法测定每克制品〓中的活菌数,应符合规定。多价制品应分别测定各单价活菌数◥。
                4.杂菌检查
                目的是检查成品中外源微生物的污染情况,以保证人体使用安全。
                方法和结果判断与半成品的“杂菌检查”项相同。
                5.安全试验
                安全试验ζ 是通过动物试验进行的非特异性毒性检查,应根据制品的使用途径█和人用剂量确定试验方法。
                (1)肠道微生态活菌制品检查  称取2g制品,加入8ml生理氯化钠溶液中,混合均匀。用5只体重18~22g小鼠,每只小鼠经口灌胃0.5ml,每天1次,连续3天。自第1天灌胃起,连续观察7天,小鼠应健康存活、体重增加,判为合格。如不合格,可另选10只小□鼠复试1次,判定标准同前◇。
                (2)阴道微生态活菌制品检查  用24~26g雌性小鼠5只,,每只小鼠阴道︻内置入10mg制品,每天1次,连续3天。自给药第一天起,连续观察7天,小鼠应健康存活、体重增加,阴道局部无红肿、分泌物等症︽状,判为合格。
                保存、运输及有效期
                按批准∮的温度保存和运输。自生产之日起〖,按批准的有效期执行。

                 

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